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山东蓝都生物科技有限公司
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技术资料/正文
猪流行性腹泻PEDV荧光步骤（ST细胞）
177 人阅读发布时间：2022-03-30 23:00
PEDV免疫荧光步骤（ST细胞）：
一. 步骤：
1.ST细胞铺96孔板一个，同步接毒或者次日接毒，吸附1h后补2%DMEM培养基，按照5%-10%接毒，每孔接50ul。
2.第3日（72h）病变。用0.01Mpbs洗三次后弃掉pbs，拍干。
3.加入冷乙醇（-20℃存放）固定20分钟，放入-20℃后弃掉上清，不拍板。
4.pbs洗三次，弃上清，不用拍板，吸干水分。
5.加入一抗（1:40稀释） 一般按照0.1 mg/ml加入。37℃防置40分钟，pbs洗三次，吸干水分。
6.加入二抗（按1:40加入，0.01pbs稀释）37 ℃防置40分钟。0.01Pbs洗4次，吸干水分，不拍板，观察。
7.显微镜亮度：1.5和3.0亮度(默认1.5亮度)
二.注意：1.做阴性对照。（不接毒，其他步骤一样）
2.最好做阳性对照。（外购单抗）
2.pbs洗要同一位点加入，要温柔。
4.接毒后72h测免疫荧光。
5.建议做不同接毒时间的荧光，选择病变在50-70%的做荧光最佳。
一. 步骤：
1.ST细胞铺96孔板一个，同步接毒或者次日接毒，吸附1h后补2%DMEM培养基，按照5%-10%接毒，每孔接50ul。
2.第3日（72h）病变。用0.01Mpbs洗三次后弃掉pbs，拍干。
3.加入冷乙醇（-20℃存放）固定20分钟，放入-20℃后弃掉上清，不拍板。
4.pbs洗三次，弃上清，不用拍板，吸干水分。
5.加入一抗（1:40稀释） 一般按照0.1 mg/ml加入。37℃防置40分钟，pbs洗三次，吸干水分。
6.加入二抗（按1:40加入，0.01pbs稀释）37 ℃防置40分钟。0.01Pbs洗4次，吸干水分，不拍板，观察。
7.显微镜亮度：1.5和3.0亮度(默认1.5亮度)
二.注意：1.做阴性对照。（不接毒，其他步骤一样）
2.最好做阳性对照。（外购单抗）
2.pbs洗要同一位点加入，要温柔。
4.接毒后72h测免疫荧光。
5.建议做不同接毒时间的荧光，选择病变在50-70%的做荧光最佳。