小分子单克隆抗体标记条件
金垫标记条件:
a. 1 ml 金液(20nm 左右)+30 微升 ( 1%K2CO3)+ 5mg/ml 抗体 1 ul,标记量为 5 微克蛋白/ ml 金液。( 先加碳酸钾还是先加抗体?)
b,室温振荡. 20-30 分。
c. 加封闭液 20 ul/ml,室温振荡.20- 30 分
d. 离心 12000 转,10 分
e. 150 ul 复溶液复溶(PH8.2),铺金
F. C 线划线: 羊抗鼠 1:30-1:100; T 线划线: 做梯度。1:10-1:100
注意事项:
- 每种蛋白抗原的物理性质不同,所以不能用一贯的千篇一律的加氯化钠的式看稳定性,要看最终 T 线颜色的深度。
- ( 每个项目期初必须做两个条件:1 是先加碳酸钾后加抗体;2 是先加抗后加碳酸钾,每种抗体不同,先后顺序直接决定线条的有无)。
- 当标记时或者吹干后出现发紫,发灰,用保护剂便可解决 。
4,1%K2CO3 配置是 1g 碳酸钾加到 100ml 水里。
目前发现 RACT,FF(3C11),cap(11E11), cpfx(7E6), TC(10E5) 等单抗都是先加抗体后加碳酸钾.
如有疑问请致电山东绿都生物食品安全检测事业部 武经理 18266598399